一、 样本运输 可冷藏(0-8℃)运输 /建议冷冻运输(尽可能长时间保持冷冻状态) 二、 样本的保存、检验与复检: 1. 尿样 1) 保存 首先,进行酸化(自然或24h尿液加入10-15 ml ,6 M HCl) 其次,保存于冷藏(2-8℃) 最后,冷藏(2-8℃)条件下保存2天 2) 检验与复检 在接收到尿样的3天内检验与复检,此期间样本中儿茶酚胺浓度稳定。 2. 血样 1) 保存 首先,建议接收血浆后加入稳定剂(EDTA和焦亚硫酸钠,终浓度分别为1和4 mM,配置见附件一) 其次,①保存于冷藏(2-8℃)/②建议分为2份冻存 2) 检验 ①收到血样后尽量马上开始检验 / ②融化冻存备份检验 3) 复检 ①血样保存于冷藏(2-8℃),待第二天复检 / ②融化冻存备份检验 三、 不同样本类型的检验顺序 尿样与血样同时检测时,先做尿样,再做血样(尿样的加样量与标准品和质控品相同) 尿样与血样的标本孔以及试管做标记区别。 四、 检验过程和标准曲线 1. 标准曲线可以作单孔,刚开始时做双孔。 2. 新鲜配置的酶溶液与标准、质控、样本的加样顺序可调换。 3. DOP多巴胺的A/B标准品,为防止出错,可以不加(加与不加差别不大)。 4. DOP多巴胺分析,萃取后尿与血的取样量不同(25和50ul); 同时,与ADR和NOR不同,DOP的标准、质控和尿液样品中需要加入25ul的HCl。 五、 连续不间断进行检测实验结果较好 六、 测量:双波长测量 七、 复检注意事项 1. 尿样的复检:尿样的异常高值,检测pH值后再次复检,因为尿液的pH值需要呈现酸性。 2. 血样的复检:推荐检测分份备存样品。 附件一 配置 50ml: (加热溶解) Na2EDTA 1mol/L 1 mol/L *5×10-2L *372.24 g/mol =18.61 g Na2S2O5 4mol/L 4 mol/L *5×10-2L *190.09 g/mol =38.02 g 使用:2ml血中加入2ul
1.实验前先将试剂放置至室温平衡30分钟。 2.严格按照试剂盒使用说明书操作。 3.包被板打开后,将剩余板条装入铝箔袋,用密封袋封好,以免污染受潮。 4.准备加样时,先将所有试剂摇匀后再开始进行实验。 5.看清加样量、操作步骤及反应时间。 6.加样头不可混用,以免交叉污染。 7.加酶结合物及抗体时,加样头不要碰触板孔(悬空加样),以免交叉污染。 8.注意试验温育时间。 9.洗涤液按1:20比例配制。例:20ml洗液+380ml蒸馏水 10.洗板时,甩干反应液,用洗液注满各孔,静置20秒,甩干孔内液体,重复5次。 11.洗涤后,将孔内残留液拍干。 12 .混合A、B底物液,在洗板前5分钟按1:1混合,混好后摇匀,避光放置。 13.加入A、 B底物后,震荡混匀,应迅速避光,等待测量。 14.避光等待测量时间,不可太长,严格控制在5—10内测量。 试剂盒注意反应原理,以便在使用仪器设置时,选择正确拟和方法。 注:夹心法——在分析方法中选择:双对数(Log-Log) 竞争法——在分析方法中选择:双对数(Log-Logit)
C-P: 空腹:0.29~3.48 餐后0.5h:2.14~17.48 餐后1h:1.2~13.92 餐后2h:0.45~8.74 餐后3h:0.41~5.52 INS: 空腹:2~25 餐后0.5h:18.6~126.84 餐后1h:9.18~103.62 餐后2h:3.57~64.58 餐后3h:3.72~25.36
误差来源:放射免疫分析误差主要来源于以下方面 1.1计数误差(counting error) 由放射性计数统计涨落和非特异计数造成的误差。同样计数时间,高放射性计数率的相对误差要比低放射性计数率的小。在实际上,每管的非特异计数率是不一样的,然而在数据处理时却把它当作一个恒定的数,从而产生非特异计数误差。在使用双道或多道γ-计数器时,还会存在“道间”计数误差。 1.2 稀释误差(diluteing error) 由配制溶液引起的误差。尤其在倍比稀释时,误差随稀释次数的增加而越来越大。 1.3 回收误差(recovery error) 由样品提取、浓缩等制备操作带来的误差。回收率对所有待测样品并不是恒定不变的。 1.4 加样误差(sampling error) 由多次加样操作带来的误差。尤其使用非连续的普通加样器时更是如此。 1.5 漂移误差(excursion error) 由长时间手工操作造成的试管间反应时间的误差。温育时间短、标本量大的分析最容易产生这种误差。 1.6 错分误差(misclassifyication error) 由分离环节带来的误差。在RIA实验中,进行结合部分与游离部分分离操作时,把结合部分分到游离部分,或把游离部分残留在结合部分,从而产生错分误差。 1.7 人员误差(personal error) 由实验人员主观原因造成的误差。其大小程度因人而异,取决于实验人员的技术素质、心理状态以及对工作的认真程度。 1.8 计算误差(calculating error) 由不同的剂量—反应曲线拟合模型造成的误差。在用计算机程序或计算器处理大量数据的今天,同一套原始实验数据在不同的数学模型下计算,获得的结果之间存在一定的差异。此外,对个别原始实验数据取舍的依据不同也会带来计算误差。
*原因 1)缓冲液里有吐温; 2)分离剂里的PEG。 *解决办法 1)停机后立刻就要吸取上清。 2)先抽吸标准,后抽吸样品。 3)抽吸的时候在管子固定位置抽吸,大概在沉淀上方10多mm左右管子的一圈凸起的部分。 4)保持抽吸手法一致,及时抽吸完发现有液滴,也无需再次抽吸;如若再次抽吸,会把沉淀抽走,导致较大偏差。

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