癌胚抗原和神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫分析试剂的研制

标记免疫学是将标记技术和免疫学技术相结合而建立起来的一门不断发展的综合学科,也是当代免疫分析的主流核心技术。利用标记免疫学原理建立的标记免疫分析技术具有灵敏度高、特异性强等优点,已被广泛应用于基础医学和临床医学领域。近年来,由于新原理、新技术的应用越来越广泛,标记免疫技术得到了一定的发展。目前最常用的标记免疫分析技术是酶联免疫分析(Enzyme1inked immunosorbent assayELISA)、化学发光免疫分析(Chemiluminescence immunoassayCLIA)、电化学发光免疫分析(Electrochemiluminescent immunoassayECLIA)和时间分辨荧光免疫分析(Time-resolved fluoroimmunoassayTRFIA)。但EIACLIAECLIATRFIA在应用中存在着一些固有的缺陷:EIA酶容易失活,导致EIA的灵敏度不高,被标记物的空间结构易受到酶的大分子标记影响,使得EIA灵敏度的提高受到限制;CLIA影响因素较多,例如易受环境干扰,发光时间短,化学反应后样品只可检测一次,无法重复测量,并且为非开放性试剂,试剂价格高;ECLIA尽管有一定优势,但也为非开放性试剂,试剂价格高;1rIn测量方式复杂,仪器成本及维修费用高,环境及样品中同位元素可导致本底受到干扰;另一方面,以上技术均有一共同的缺点:需通过洗涤分离结合标记与游离标记。因此,有必要开发出能避免以上缺陷的新型标记技术。由此光激化学发光免疫分析(Amplifiedluminescent proximity homogenous assayAlphaLISA)技术应运而生。该技术起源于1994年发明的单线态氧分子能量传递发光免疫分析技术(Luminescentoxygen channeling immunoassayLOCI),后美国PerkinElmer公司生产相关试剂(AlphaScreen@)。作为近年兴起的新型定量均相免疫学检测技术,它克服了传统标记免疫学技术需洗涤分离结合标记与游离标记的缺点的同时,还克服了EIA稳定性差、CLIAECLIA无法重复测量及成本高等缺点。它结合激光技术、单线态氧半衰期短和纳米材料等优势,实现了在均相中进行反应的操作过程。光激化学发光免疫分析技术具有高通量、高灵敏度、不需分离结合标记与游离标记、无放射性污染、检测重复性好、操作简单、易于自动化、背景信号低等优势,已广泛应用于生物医学研究,代表了现在及未来分析检测技术的发展趋势。

 

血清癌胚抗原(Carcinoembryonic antigenCEA)为一种传统的广谱肿瘤标志物,一直受到广泛的研究。它属于胚胎期和胎儿形成期产生的胎儿癌性抗原。首先发现于胎儿体内和结肠癌组织,是由胎儿胃肠道上皮组织、胰腺和肝脏细胞合成的一种相对分子量约为200 KDa的复杂的可溶性糖蛋白。正常人组织内含量很低,但在胃肠道恶性肿瘤患者的血清中CEA含量明显升高。此外,在妇科肿瘤、肺癌及其他恶性肿瘤患者的血清中也有所升高。CEA虽然不能作为特异性指标诊断某种恶性肿瘤,但在恶性肿瘤的鉴别诊断、病情监测及疗效评价等方面仍有重要的临床价值。本研究主要是研制癌胚抗原光激化学发光免疫分析试剂,探讨其用于临床检测的可行性。

神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolaseNSE)主要分布于神经元、神经内分泌细胞。在起源于神经外胚层或神经内分泌组织的肿瘤病人血清、脑脊液中NSE水平升高,其中患小细胞肺癌和神经母细胞瘤的患者尤为明显。目前NSE被认为是脑损伤(神经母细胞瘤、急性脑血管疾病、缺氧性损伤等)和小细胞肺癌的一项高特异性和高敏感性的生化指标,对小细胞肺癌病人和颅脑损伤病人的早期诊断、病情监测、疗效评价等有重要价值。本研究主要是研制神经元特异性烯醇化酶光激化学发光免疫Ⅱ分析试剂,探讨其用于临床检测的可行性。


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编辑:李芳  来源:南方医科大学2008级硕士学位论文  浏览次数:0 发布时间:2014-07-03 14:23:37